Akeylan zäherinde karboksil ester baglanyşyklaryny gidrolizleýän fermentler bar.Gidroliz üçin substratlar fosfolipidler, asetilkolin we ysly asetatdyr.Bu fermentler üç görnüşi öz içine alýar: fosfolipaza, asetilkolinesteraza we ysly esteraza.Akeylan zäherindäki arginin esterazasy sintetiki arginini ýa-da lizini hem gidroliz edip biler, ýöne esasan tebigatda belok peptid baglanyşyklaryny gidrolizleýär, şonuň üçin proteaza degişlidir.Bu ýerde ara alnyp maslahatlaşylan fermentler diňe ester substratlarynda hereket edýär we haýsydyr bir peptid baglanyşygynda hereket edip bilmeýär.Bu fermentleriň arasynda asetilkolinesterazyň we fosfolipazyň biologiki funksiýalary has möhümdir we doly öwrenilipdir.Käbir ýylan zäherlerinde p-nitrofenil etil esterini, a - ýa-da P-naftalin asetaty we indol etil esterini gidrolizläp bilýän güýçli ysly esteraza işjeňligi bar.Bu işiň garaşsyz ferment tarapyndan öndürilýändigi ýa-da biologiki ähmiýetini goýman, karboksilesterazyň belli bir täsiri barlygy entek belli däl.Agkistrodon halys Japonicusyň zäheri p-nitrofenil etil efir we indol etil efir bilen reaksiýa berlende, p-nitrofenolyň we indol fenolyň gidrolizatlary tapylmady;Munuň tersine, bu esterler kobra ousoushan kiçi ýylan zäheri we Bungarus multicinctus ýylan zäheri bilen reaksiýa bildirse, çalt gidroliz ediler.Bu kobra zäherleriniň ýokardaky substratlaryň gidrolizine sebäp bolup biljek güýçli holinesteraz işjeňliginiň bardygy mälimdir.Aslynda, Mclean we başgalar.(1971) Kobra maşgalasyna degişli köp ýylan zäherleriniň indol etil esterini, naftalin etil esterini we butil naftalin esterini gidroliz edip biljekdigi habar berildi.Bu ýylan zäherleri şulardan gelýär: kobra, gara boýunly kobra, gara dodakly kobra, altyn kobra, müsür kobrasy, şa kobra, altyn kobra mamba, gara mamba we ak dodakly mamba (D. aw henizem gündogar rombola rattlesnake bilýär)
Akeylan zäheri serumdaky holinesteraz işjeňligini kesgitlemek üçin substrat bolan metil indol etil esterini gidroliz edip biler, ýöne bu ýylan zäheri holinesteraz işjeňligini görkezmeýär.Bu, holinesterazdan tapawutly kobra zäherinde näbelli esterazyň bardygyny görkezýär.Bu fermentiň tebigatyna düşünmek üçin has köp aýralyk işi zerurdyr.
1 os Fosfolipaza A2
(I) Gysgaça syn
Fosfolipaza gliseril fosfaty gidrolizläp bilýän fermentdir.Tebigatda fosfolipazyň 5 görnüşi bar, ýagny fosfolipaza A2 we fosfolipaza
A., fosfolipaza B, fosfolipaza C we fosfolipaza D. akeylan zäherinde esasan fosfolipaza A2 (PLA2) bar, birnäçe ýylan zäherinde fosfolipaza B bar, beýleki fosfolipazalar esasan haýwan dokumalarynda we bakteriýalarda bolýar.3-11-4-nji suratlarda substrat gidrolizinde bu fosfolipazalaryň hereket edýän ýeri görkezilýär.
Fosfolipazlaryň arasynda PLA2 has köp öwrenildi.Akeylan zäherinde iň köp öwrenilen ferment bolup biler.Onuň substraty, Sn-3-gliserofosfatyň ikinji ornundaky ester baglanyşygydyr.Bu ferment ýylanyň zäherinde, ary zäherinde, garpyz zäherinde we haýwan dokumalarynda giňden duş gelýär we PLA2 dört maşgala ýylan zäherinde köp.Bu ferment gyzyl gan öýjüklerini döwýär we gemolizi döredýär, oňa "gemolizin" hem diýilýär.Käbir adamlar PLA2 gemolitik lesitinaza hem diýýärler.
Ludeeke ilki bilen ýylan zäheriniň fermentler arkaly lesitine täsir edip gemolitiki birleşme öndürip biljekdigini anyklady.Soň Delezenne we başgalar.Kobra zäheriniň at seriýasynda ýa-da sarysynda hereket edende, gemolitiki madda emele getirýändigini subut etdi.PLA2-iň eritrosit membranasynyň fosfolipidlerine gönüden-göni täsir edip, eritrosit membranasynyň gurluşyny ýok edip, göni gemoliz döredip biljekdigi indi mälimdir;Şeýle hem gytaklaýyn gemoliz öndürmek üçin gyzyl gan öýjüklerine täsir edýän gemolitik lesitini öndürmek üçin serumda ýa-da lesitin goşup biler.PLA2 ýylan zäherleriniň dört maşgalasynda köp bolsa-da, dürli ýylan zäherlerindäki fermentleriň düzümi birneme tapawutlanýar.Rattlesnake (C.
Akeylan zäheri diňe gowşak PLA2 işjeňligini görkezýärdi.3-11-11-nji tablisada Hytaýda zäherli ýylanlaryň 10 sany zäheriniň PLA2 işjeňliginiň deňeşdirilişi görkezilýär.
3-11-11-nji tablisa Hytaýda 10 sany ýylan zäheriniň fosfolipaza VIII işjeňligini deňeşdirmek
Akeylan zäheri
Releaseag goýbermek
Alifatik kislotasy,
Cjumol / mg)
Gemolitiki işjeňlik CHU50 / ^ g * ml)
Akeylan zäheri
Acagly kislotalary goýberiň
(^ raol / mg)
Gemolitiki işjeňlik “(HU50 / ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
on bir
Mikracefal ofis
bäş nokat
kalyspallas
8. 68
iki müň sekiz ýüz
gracilis
V, akutus
7. 56
* * #
Ophiophagus hannah
üç nokat sekiz iki
bir ýüz kyrk
Bnugarus fasctatus
7,56
iki ýüz segsen
B. köp merkezli
bir nokat dokuz alty
iki ýüz segsen
Vussel russelli
ýedi nokat nol üç
T, mukroskamat
bir nokat sekiz bäş
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
（2） Aýralyk we arassalamak
Akeylan zäherindäki PLA2-iň düzümi köp, PLA2-ni arassalamak we aýyrmak aňsat bolar ýaly, ýylylygy, kislotany, aşgar we denaturanty durnuklaşdyrýar.Adaty usul, ilki bilen çig zäherde jel süzgüçini geçirmek, soňra ion çalşygy hromatografiýasyny geçirmek we indiki ädim gaýtalanyp bilner.Ion alyş-çalyş hromatografiýasyndan soň PLA2-iň doňmagy bilen guramagynyň agregasiýa sebäp bolmaly däldigini bellemelidiris, sebäbi doňdurma-guratma prosesi köplenç PLA2-iň jemlenmegine sebäp bolýan möhüm faktor bolan ulgamdaky ion güýjüni ýokarlandyrýar.Aboveokardaky umumy usullardan başga-da aşakdaky usullar hem kabul edildi: ① Wells we ş.m.P PLA2-iň substrat analogy ýakynlyk hromatografiýasy üçin baglanyşyk hökmünde ulanyldy.Bu bag, Ca2 + bilen ýylan zäherinde PLA2 bilen baglanyşyp biler.EDTA esasan eluent hökmünde ulanylýar.Ca2 + aýrylandan soň, PLA2 bilen liganyň arasyndaky ýakynlyk azalýar we ligandan aýrylyp bilner.Beýlekiler bolsa 30% organiki ergini ýa-da 6mol / L karbamidini eluent hökmünde ulanýarlar.③ Gidrofobik hromatografiýa, kardiotoksindäki PLA2 yzyny aýyrmak üçin PheiiylSephar0SeCL-4B bilen geçirildi.④ Anti PLA2 antikor, PLA2-de ýakynlyk hromatografiýasyny ýerine ýetirmek üçin ligand hökmünde ulanyldy.
Şu wagta çenli köp sanly ýylan zäheri PLAZ arassalandy.Tu we başgalar.(1977) 1975-nji ýyla çenli ýylan zäherinden arassalanan PLA2 sanawyna girizildi. Soňky ýyllarda her ýyl PLA2-ni bölmek we arassalamak barada köp sanly makalalar habar berildi.Bu ýerde, hytaý alymlary tarapyndan PLA-nyň bölünmegine we arassalanmagyna ünsi jemleýäris.
Çen uanuancong we başg.(1981) üç sany PLA2 görnüşini, izoelektrik nokatlaryna görä kislotaly, bitarap we aşgar PLA2-e bölüp boljak Zhejiangdaky Agkistrodon halys Pallas zäherinden aýyrdy.Zäherliligine görä, presinaptiki neýrotoksin Agkistrodotoksin diýlip kesgitlenen bitarap PLA2 has zäherlidir.Alkogolly PLA2 az zäherlidir we kislotaly PLA2 zäherliligi ýok diýen ýaly.Wu Sýanfu we başgalar.(1984) molekulýar agram, aminokislotanyň düzümi, N terminaly, izoelektrik nokady, ýylylyk durnuklylygy, ferment işjeňligi, zäherlilik we gemolitiki işjeňlik ýaly üç PLA2-iň aýratynlyklaryny deňeşdirdi.Netijeler meňzeş molekulýar agramyň we ýylylyk durnuklylygynyň bardygyny, ýöne beýleki taraplarda düýpli tapawudynyň bardygyny görkezdi.Fermentleriň işjeňliginde kislota fermentleriniň işjeňligi aşgar ferment işjeňliginden has ýokarydy;Alkogol fermentiniň syçanyň gyzyl gan öýjüklerine gemolitiki täsiri iň güýçli boldy, soňundan bitarap ferment we kislota fermenti gemolizlenmedi.Şonuň üçin PLAZ-nyň gemolitiki täsiriniň PLA2 molekulasynyň zarýady bilen baglanyşyklydygy çak edilýär.Zhang Jingkang we başg.(1981) Agkistrodotoksin kristallaryny ýasady.Tu Guangliang we başgalar.. terminaly kesgitlenildi.Li esheşeng we başgalar.(1985) Fujian şäherindäki Viper rotundus zäherinden başga bir PLA2 izolýasiýa etdi we arassalady.PLA2 * -iň aşaky bölegi 13 800, izoelektrik nokady 10,4, anyk işjeňligi 35 / xnioI / miri mg le Substrat hökmünde lesitin bilen fermentiň optimal pH 8.0, optimal temperatura 65 ° C LD5 syçanlara wena içine sanjym edildi.0,5 ± 0.12mg / kg.Bu fermentiň antikoagulyant we gemolitiki täsiri bar.Zäherli PLA2 molekulasy 18 görnüşli aminokislotalaryň 123 galyndysyndan durýar.Molekula sisteine (14), aspartik kislotasyna (14) we glisine (12) baý, ýöne diňe bir metionini öz içine alýar we N terminaly serin galyndysydyr.Tuguang tarapyndan izolirlenen PLA2 bilen deňeşdirilende, iki izoenzimiň molekulýar agramy we aminokislotanyň galyndylarynyň sany gaty meňzeýär, aminokislotanyň düzümi hem gaty meňzeýär, ýöne aspartik kislotanyň we proliniň galyndylarynyň sany birneme tapawutlanýar.Guangxi king kobra ýylan zäherinde baý PLA2 bar.Şu uanuýan we başg..Esasy PLA2-iň gyzyl gan öýjüklerine edýän täsirini elektron mikroskop bilen synlamakdan, adamyň gyzyl gan öýjük membranasyna aç-açan täsir edýändigini, ýöne geçiniň gyzyl gan öýjüklerine aç-açan täsiriniň ýokdugyny görmek bolýar.Bu PLA2, adamlarda, geçilerde, towşanlarda we gwineýa doňuzlarynda gyzyl gan öýjükleriniň elektroforetiki tizligine aç-açan yza täsir edýär.Çen we başgalar.Bu ferment ADP, kollagen we natriý arahidon turşusy bilen döredilen trombositleriň birleşmegini saklap biler.PLA2 konsentrasiýasy 10 / xg / ml ~ lOOjug / ml bolanda, trombositleriň birleşmegi doly saklanýar.Wasuwulan trombositler material hökmünde ulanylsa, PLA2 20Mg / ml konsentrasiýasynda jemlenmegi saklap bilmezdi.Aspirin, PLA2-iň trombositlere täsirini saklap bilýän siklooksigenazyň inhibitorydyr.PLA2 tromboksan A2 sintez etmek üçin arahidon turşusyny gidrolizlemek arkaly trombositleriň birleşmegini saklap biler.Zhejiang welaýatynda Agkistrodon halys Pallas zäheriniň öndüren PLA2-iň ergin konfigurasiýasy tegelek diokroizm, floresan we UV siňdirilmegi arkaly öwrenildi.Synag netijeleri, bu fermentiň esasy zynjyr görnüşiniň beýleki görnüşlerden we görnüşlerden bolan fermentlere meňzeşdigini, skeletiň üýtgemeginiň gowy ýylylyga garşydygyny we kislota gurşawynyň gurluş üýtgemeleriniň tersine bolandygyny görkezdi.Aktiwator Ca2 + bilen fermentiň birleşmegi, triptofan galyndylarynyň gurşawyna täsir etmeýär, Zn2 + inhibitory bolsa tersine.Erginiň pH bahasynyň ferment işjeňligine täsir etmegi ýokardaky reagentlerden tapawutlanýar.
Akeylan zäherini PLA2 arassalamak işinde, ýylanyň zäherinde iki ýa-da has köp PLA2 elitasiýa pikiniň bolmagy aýdyň bir hadysa.Bu hadysany şeýle düşündirip bolar: iso izozimleriň bolmagy sebäpli;P PLA2-iň bir görnüşi dürli molekulýar agramly dürli PLA2 garyndylaryna polimerizasiýa edilýär, köpüsi 9 000 ~ 40 000 aralygyndadyr;P PLA2 we beýleki ýylan zäher komponentleriniň birleşmegi PLA2-ni çylşyrymlaşdyrýar;P PLA2-de amid baglanyşygy gidrolizlenenligi sebäpli zarýad üýtgeýär.① We common adaty, diňe birnäçe kadadan çykmalar bilen, CrWa / w ýylan zäherindäki PLA2 ýaly
Iki ýagdaý bar: ① we ②.Üçünji ýagdaý PLA2-de aşakdaky ýylanlaryň zäherinde tapyldy: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^> er, Palestina ýylan, gum möjek we elhenç gyrgyç km。
Işiň netijesi elect elektroforez wagtynda PLA2-iň göçüş tizligini üýtgedýär, ýöne aminokislotanyň düzümi üýtgemeýär.Peptidleri gidroliz bilen döwüp bolýar, ýöne köplenç disulfid baglanyşyklary bilen birleşdirilýär.Gündogar çukur çeňňeginiň zäheri degişlilikde A görnüşi we p PLA2 görnüşi diýlip atlandyrylýan iki görnüşi öz içine alýar.PLA2-iň bu iki görnüşiniň arasyndaky tapawut diňe bir aminokislotadyr, ýagny bir PLA2 molekulasyndaky glýutamin beýleki PLA2 molekulasynda glutam turşusy bilen çalşyrylýar.Bu tapawudyň takyk sebäbi aýdyň bolmasa-da, munuň PLA2 dezinasiýasy bilen baglanyşyklydygyna ynanýarlar.Palestina ýylan zäherindäki PLA2 çig zäher bilen ýyly saklansa, ferment molekulalarynyň ahyrky toparlary öňküsinden has köp bolar.Akeylan zäherinden izolirlenen C PLA2-den iki dürli N terminaly bar we molekulýar agramy 30000-e ýetýär. Bu hadysa, PLA2-iň asimmetrik ölçegi sebäpli ýüze çykyp biler, bu bolsa PLA2-iň gündogar göwher göwresiniň zäherinde emele gelen simmetrik ölçege meňzeýär. we günbatar göwher gyrgysy.Aziýa kobrasy köp görnüşlerden durýar, olaryň käbiri klassifikasiýa taýdan gaty kesgitli däl.Mysal üçin, öň “Kobra Daşarky Kaspi” kiçi görnüşleri diýilýän zat indi ykrar edildi
Daşarky Hazar deňziniň kobrasyna degişli bolmaly.Köp kiçi görnüşler bar we biri-biri bilen garyşýandygy sebäpli, dürli çeşmeler sebäpli ýylanyň zäheriniň düzümi gaty üýtgeýär we PLA2 izozimleriniň düzümi hem ýokary.Mysal üçin, kobra zäheri
R ^ ll görnüşleriniň azyndan 9 görnüşi PLA2 izozimasy, Kaspi kobra kiçi zäherinde 7 görnüşli PLA2 izozim tapyldy.Durkin we başgalar..Umuman alanyňda, kobra zäheriniň PLA2 işjeňligi köp, izozimler köp.PLA2 işjeňligi we möjek zäheriniň izozimleri orta.Mamba zäheriniň we möjek zäheriniň PLA2 işjeňligi gaty pes ýa-da PLA2 işjeňligi ýok.Deňiz ýylan zäheriniň PLA2 işjeňligi hem pesdir.
Soňky ýyllarda ýylan zäherindäki PLA2-iň gündogar rombofora gyrgysy ýaly işjeň dimer görnüşinde barlygy habar berilmedi (C. ýylanyň zäherinde A görnüşi we P PLA2 görnüşi bar, ikisi hem birmeňzeş subunitlerden durýar. we diňe dimeraz bar
Iş.Şen we başgalar.Şeýle hem ýylan zäheriniň PLA2 ölçeginiň fermentiň işjeň görnüşidigini öňe sürdi.Giňişlik gurluşyny öwrenmek, günbatar göwher gyrgyçly PLA2-iň dimer görnüşinde bardygyny subut edýär.Düwürtik birleşme
Akeylan zäheriniň iki dürli PLA ^ Ei we E2 bar, olarda dim dimer görnüşinde bar, dimer işjeň we bölünen monomer hereketsiz.Lu inginghua we başgalar.(1980) mundan beýläk E.Jaýanthi we başgalaryň fiziki we himiki aýratynlyklaryny we reaksiýa kinetikasyny öwrendi.(1989) esasy PLA2 (VRVPL-V) ýylan zäherinden izolýasiýa edildi.PLA2 monomeriniň molekulýar agramy 10000 bolup, öldüriji, antikoagulyant we ödem täsirleri bar.Ferment, PH 4.8 şertinde dürli molekulýar agramly polimerleri polimerleşdirip biler, polimerizasiýa derejesi we polimerleriň molekulýar agramy temperaturanyň ýokarlanmagy bilen ýokarlanýar.96 ° C-de emele gelen polimeriň molekulýar agramy 53 100, bu polimeriň PLA2 işjeňligi iki esse ýokarlanýar
Iş wagty: Noýabr-18-2022